NEB限制性?xún)惹忻?br /> ——HF高保真酶、省時(shí)酶、Golden Gate 無(wú)縫克隆IIS內切酶

 
北京澤平代理美國進(jìn)口NEB公司（New England Biolabs）限制性?xún)惹忻�、緩沖液buffer、試劑盒等，提供業(yè)內更豐富的300種限制性?xún)惹忻?/strong>，涵蓋EcoRI、XbaI、BamHI 等II型限制性?xún)惹忻�，以及BsaI-HFv2、BsmBI-v2 等IIS型限制性?xún)惹忻?/strong>，并提供36種HF高保真限制性?xún)惹忻?/strong>、180種省時(shí)限制性?xún)惹忻?/strong>（省時(shí)酶，同時(shí)支持5min快切、過(guò)夜酶切）、210種使用通用buffer的限制性?xún)惹忻福ǚ奖汶p酶切）、以及GMP級別產(chǎn)品，大量用于生物實(shí)驗的傳統克隆、無(wú)縫克隆、甲基化分析、定點(diǎn)突變等應用，具備高活性、高批次間一致性，滿(mǎn)足生命科學(xué)實(shí)驗室基礎研究、生物制藥企業(yè)的廣泛需求。

美國NEB公司自1975年起研發(fā)生產(chǎn)商品化的限制性?xún)惹忻�，距今已�?span style="color:#FF0000">50年的歷史，產(chǎn)品以高性能、高穩定性著(zhù)稱(chēng)。NEB內切酶基本都采用基因工程重組法生產(chǎn)，重組內切酶活性高、純度高、無(wú)其他酶污染，其高保真內切酶、省時(shí)酶等產(chǎn)品獲得廣大用戶(hù)認可。



 
1、NEB HF高保真限制性?xún)惹忻?/span>

①低星號活性——通過(guò)基因工程改造，避免非特異性切割，具備更低的星號活性，酶切反應條件更加靈活；

②省時(shí)內切酶——高保真酶同時(shí)作為省時(shí)酶，支持5~15min快速酶切DNA，或過(guò)夜酶切，而不產(chǎn)生星號活性或DNA降解；

③方便雙酶切——所有高保真內切酶在NEB rCutSmart通用緩沖液buffer中均保持100%酶切活性，方便雙酶切操作；

④高純度高一致性——嚴格質(zhì)控，高純度，消除核酸酶污染，酶切末端完整不被降解，具備高批次間一致性，高重現性；

⑤送上樣染料——隨高保真酶贈送6×紫色凝膠上樣染料，消除電泳時(shí)染料的紫外陰影，含有SDS避免內切酶和DNA結合產(chǎn)生超大條帶，改善電泳分析。

建議優(yōu)先選擇高保真內切酶，如沒(méi)有合適位點(diǎn)，可選擇NEB省時(shí)酶。



圖. 在高濃度條件，NEB EcoRl-HF 過(guò)夜酶切也不會(huì )產(chǎn)生星號活性。50μL反應體系中加入1μg Lambda DNA、圖示不同濃度的酶以及相應的反應緩沖液，在37℃下過(guò)夜酶切。M為1kb DNA Ladder。

 

 
2、NEB省時(shí)酶

酶切時(shí)長(cháng)靈活——提供超過(guò)180種省時(shí)限制性?xún)惹忻�，支�?~15min快速酶切DNA，或過(guò)夜酶切，而不產(chǎn)生星號活性或DNA降解。



圖. NEB Hindll-HF 能夠在5分鐘內完全酶切1μg DNA，也可用于過(guò)夜酶切，而不發(fā)生非特異性酶切或降解。M為1kb DNA Ladder。

 

 
3、共用rCutSmart緩沖液的內切酶

①方便雙酶切——提供超過(guò)210種統一使用NEB rCutSmart 緩沖液的限制性?xún)惹忻�，其在rCutSmart buffer 中具有100%活性，方便雙酶切操作；

②簡(jiǎn)化實(shí)驗流程——多種DNA修飾酶在rCutSmart緩沖液中具有100%活性，限制性?xún)惹忻柑幚砗鬅o(wú)需純化樣本，方便繼續克隆，簡(jiǎn)化實(shí)驗流程；

③減少酶吸附——rCutSmart buffer 包含重組蛋白，可防止內切酶粘附在反應管和移液吸頭表面。

④送上樣染料——大部分內切酶贈送6×紫色凝膠上樣染料，消除電泳時(shí)染料的紫外陰影，含有SDS避免內切酶和DNA結合產(chǎn)生超大條帶，改善電泳分析。



 

 
4、NEB無(wú)縫克隆用NEBridge Golden Gate 組裝IIS型內切酶

提供業(yè)內更豐富的50種IIS型限制性?xún)惹忻�，其�?種經(jīng)Golden Gate 組裝（金門(mén)組裝）驗證，可用于≤52個(gè)DNA片段的無(wú)縫克隆。

①高組裝效率——支持單管完成≤52個(gè)片段的復雜片段組裝，具備非常高的組裝效率，其中≤30個(gè)片段的組裝效果更佳；

②兼容性強——支持高GC含量、高重復序列、＜100bp片段、＞15kb片段的組裝；

③使用靈活——提供NEBridge Golden Gate 組裝試劑盒、9種經(jīng)Golden Gate 組裝驗證的IIS型限制性?xún)惹忻�、連接酶預混液（添加連接增強劑）、T4連接酶等豐富產(chǎn)品形式，供實(shí)驗人員靈活選擇。

④設計工具——提供GoldenGate.neb.com 在線(xiàn)設計軟件，可以方便、快捷地進(jìn)行Golden Gate 組裝引物設計。



以IIS型限制性?xún)惹忻窧saI-HFv2為例，進(jìn)行Golden Gate 組裝時(shí)，需要在dsDNA片段的兩端加上其識別位點(diǎn)（GGTCTC）。酶切后，識別位點(diǎn)被移除，組裝片段末端帶有設計好的特定4堿基突出以指導組裝。



對于包含12、24、35、52個(gè)片段的Golden Gate 組裝反應，顯示了含有正確組裝的菌落百分比。誤差線(xiàn)為至少3個(gè)重復的標準差。以下幾篇文獻對此進(jìn)行了報道：

1. Pryor, J.M., et al. (2022) ACS Synth. Biol. e0525
2. Pryor, J. M. et al. (2020). PLoS One, e8592
3. Potapov, V. et al. (2018). ACS Synth. Biol., e0333 

 
 

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